产品简介

GBCBIO公司的血凝块DNA提取试剂盒可一次性地处理200mg左右的血凝块，血凝块无需研磨，直接加裂解液消化，在30分钟内完成单个或多个样品的操作。该试剂盒不需要酚氯仿抽抽提，或者耗时的操作（如异丙醇沉淀）。使用该试剂盒提取到的DNA可以用于PCR，Southern杂交，酶切消化等实验。

试剂盒组成

      *Protease K含有50%甘油，吸取时，移液器不能伸得太入，以免吸头外壁带走Protease K

储存和稳定性

Blood Clot DNA Kit在购买后按以下方式储存可保存至少12个月；Protease K储于-20℃，其它组成储于室温（22-25℃）。BL在低温下可能会出现沉淀，加热到37℃溶解沉淀。

实验前准备

请详细阅读该手册并熟悉各个步骤，在开始之前准备好所有的试剂盒组分和必需的器材。

浓缩的DNA Wash Buffer需用无水乙醇按如下稀释：

D1111 加8 ml；D1115加入52 ml ；D1116加入104 ml 无水乙醇

浓缩的Buffer WB需用无水乙醇按如下稀释：

D1111 加2 ml；D1115加入14ml ；D1116加入28ml，D1117加入56ml 无水乙醇

操作步骤

注意：以下方案适用200mg血凝块的操作方案，更大体系按比例增加相关溶液的用量。DNA Wash Buffer提供的浓缩液，需按前面的说明进行稀释。

1.        取200mg的血凝块于2ml的离心管中。

2.        加入20μl Protease K(20mg/ml)和400μl Buffer BL，最高速度涡旋15秒充分混匀。如果需要得到无RNA的基因组DNA，每个样品加入5μl RNA酶（10mg/ml，需另购买，GBCBIO货号P3414）。

3.        70℃水浴直至血凝块完全消化（一般情况下，10-20min即可）。孵育过程中颠倒混匀几次。

4.        加入250ul无水乙醇（96-100%，室温）至裂解液中，最高速度涡旋20秒混匀，稍微离心以收集盖子上的液滴（可不离心）。

5.        把GBC吸附柱装在在2ml收集管中（已提供），将第4步得到的溶液全部转入柱中，10,000×g离心1min，倒弃流出液重新套上收集管。

6.        加入500μl Buffer WB至柱子中，10,000×g离心1min，弃去流出液。

注意：Buffer WB使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。

7.        将GBC吸附柱重新套回2ml收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前须要用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。

8.        再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液；

9.        将GBC吸附柱重新套回2ml收集管中，最大转速（>13.000×g）离心空结合柱1min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。

10.      将柱子置于1.5ml灭菌离心管，加入30-80μl 65℃预热的TE或灭菌去离子水至柱子的膜中央。 室温静置于5min；

11.      室温下，离心(>13.000)1min，以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。注意：为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置2分钟，1,2000rpm离心2分钟。洗脱缓冲液体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。