β-半乳糖苷酶染色试剂盒

更新:2020-1-3 15:15:52

中文名:β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明书下载暂无
英文名:β-Galactosidase Staining Kit
描述:β-半乳糖苷酶染色试剂盒(β-Galactosidase Staining Kit)是以X-Gal为底物,在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测,也可以用于组织切片的衰老检测。 绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力,在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。此时细胞仍然是存活的,但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。衰老(senescence)的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂,并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊,不同于一些损伤诱导的细胞休眠,也不同于细胞生长接触抑制的情况。衰老细胞细胞通常体积变大,表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式,同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
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    G0622100T520GBCBIO
产品介绍

    产品简介:

     β-半乳糖苷酶染色试剂盒(β-Galactosidase Staining Kit)是以X-Gal为底物,在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测,也可以用于组织切片的衰老检测。

    绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力,在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。此时细胞仍然是存活的,但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。衰老(senescence)的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂,并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊,不同于一些损伤诱导的细胞休眠,也不同于细胞生长接触抑制的情况。衰老细胞细胞通常体积变大,表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式,同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。

     

    储存和稳定性:

      -20℃保存,一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。

     

    试剂盒组成:

    次数

    G0622-100T

    4%多聚甲醛固定液

    100ml

    X-gal 溶液

    5ml

    β-半乳糖苷酶染色A

    1ml

    β-半乳糖苷酶染色B

    1ml

    β-半乳糖苷酶染色C

    100ml

    使用说明:

    1. 对于贴壁细胞:

    1.1.对于6孔板中培养的细胞,吸除细胞培养液,用PBS或HBSS洗涤1次,加入1毫升4%多聚甲醛固定液,室温固定15分钟。对于其它类型的培养板,固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。

    1.2.吸除细胞固定液,用PBS或HBSS洗涤细胞3次,每次3分钟。

    1.3.吸除PBS或HBSS,每孔加入1毫升染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器,不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器配制染色工作液。染色工作液按下表比列配制:

    β-半乳糖苷酶染色A

    10μl

    β-半乳糖苷酶染色B

    10μl

    β-半乳糖苷酶染色C

    930μl

    X-gal 溶液

    50μl

    说明:对于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的简单的判定方法是:聚丙烯容器可以高温高压灭菌; 而聚苯乙烯容器不适合高温高压灭菌,一旦高温高压处理就会严重变形。配制染色工作液时,可能有少量絮状沉淀出现,震荡混匀后就会完全溶解,且需要待溶解完全后才能使用。

    1.4.37℃孵育过夜,可以用parafilm或保鲜膜封住6孔板防止蒸发。注意:37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。

    1.5.普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数,可以去除染色工作液,加入2毫升PBS,4℃可以保存数天;或者加上封片液封片后,4℃可以保存较长时间。

    2. 对于悬浮细胞:

    2.1. 离心收集细胞至1.5ml离心管内,用PBS或HBSS洗涤1次,加入1毫升4%多聚甲醛固定液,室温固定15分钟。固定时可以在摇床上缓慢摇动,以避免细胞结成团块。

    2.2. 离心,吸除细胞固定液,用PBS或HBSS洗涤细胞3次,每次3分钟。

    2.3. 离心,吸除PBS或HBSS,每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法参考上表。

    2.4. 37℃孵育过夜。注意:37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。

    2.5. 取部分染色后的细胞,滴加到载玻片上或6孔板内,普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数,可以离心,去除染色工作液,然后加入1毫升PBS,4℃可以保存数天。如果离心,取细胞用于涂片,加上封片液封片后,4℃可以保存较长时间。

    3. 对于组织切片:

    3.1. 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡和水化处理。对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。

    3.2. 加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液,以充分盖住组织为宜,室温固定不少于15分钟。

    3.3. 用PBS浸泡洗涤组织3次,每次不少于5分钟。

    3.4. 吸除PBS,加入适当量的染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。

    3.5. 37℃孵育过夜,可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发。最好把整个切片浸泡在染色工作液中。

    注意:37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。

    3.6. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察,加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。
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