本产品为即用型溶液，粉末用0.9%NaCl配置成10mg/ml的溶液，并用0.22μM滤膜过滤除菌。使用时一般按1:1000-1：2000稀释，依细胞种类不同稀释比例不同，具体查阅相关文献。

注：Polybrene对某些细胞（如末端分化的神经元，DC细胞）毒性较大，初次应用建议先做毒性测试。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。-20 ºC可保存2年，建议分装保存，避免反复冻融。

操作步骤(仅供参考，具体使用浓度请参考相关文献)

实验1：逆转录病毒感染（Retroviral Infection）

（1） 重组逆转录病毒原液的制备：取5ml生长培养基（5%血清）加入约含单层转染逆转录包装细胞的100mm培养盘内。孵育24h后，吸去培养液并用0.45μm滤器过滤。

（2）待感染细胞的培养：100mm培养盘内加入10ml完全培养基，细胞密度为5×105/盘。

（3）病毒感染：细胞培养24h后，吸去完全培养液。用含polybrene的2ml病毒上清 （或将病毒原液稀释到2ml）感染细胞，polybrene的终浓度为5μg-10μg/ml。37°C孵育3-6h。

（4）收集病毒颗粒：加入8ml完全培养基。感染3天后，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。

实验2：转染

（1）完全生长培养基培养细胞，培养细胞密度约50%；

（2）孵育细胞18-24h后准备DNA-培养基- Polybrene混合液，按如下操作制备混合液：①添加完全培养基（60mm培养皿2ml，100mm培养皿3ml），37°C预热；②添加10ng~10µg质粒轻轻混匀；③加入Polybrene至终浓度为5μg-10μg/ml。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。

（3）去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37°C孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h内约每1.5h轻柔混匀。

（4）去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution（15%DMSO in 1X HBSS）轻轻盖住细胞（60mm培养皿3ml，100mm培养皿4ml）。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s，使得液体均匀分布。然后37°C孵育细胞4min。

（5）立即去除DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5ml培养液清洗，100mm培养皿每次用10ml培养液清洗。

（6）加入完全培养基到细胞中；

（7）稳定转化：去除生长培养基，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。

瞬时表达：去除生长培养基，加入新鲜的生长培养基。24-72h后收获细胞。