品简介

本试剂盒是专门用于从血浆、全血、无细胞体液、病毒原液和感染病毒的组织中提取游离DNA的试剂盒。循环 DNA 是指游离在细胞外的 DNA，它是细胞调亡产生的。循环 DNA 片断一般在 1KB 以下。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚

氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀。得到的循环 DNA 可直接用于定量 PCR，液相或固

相芯片分析，杂交和 SNP 检测等分析。

试剂盒组成

   *Protease K含有50%甘油，吸取时，移液器不能伸得太入，以免吸头外壁带走Protease K

储存和稳定性

在购买后按以下方式储存可保存至少12个月；Protease K储于-20℃，其它组成储于室温（22-25℃）。Buffer BL在低温下可能会出现沉淀，加热到37℃溶解沉淀。

实验前准备

请详细阅读该手册并熟悉各个步骤，在开始之前准备好所有的试剂盒组分和必需的器材。

操作步骤

以下操作以1000μl 液体样品为例，更大的样品处理量，请将试剂按比例增加。更多的试剂需另外购买。

1.取1000μl 血清、血浆或者其他无细胞液体样品置于2ml离心管中。

2.加入1000μl Buffer BL 、20μl Protease K，最高速度涡旋15秒充分混匀。

3.65℃水浴10分钟。孵育过程中短暂涡旋管子一次。

4. 加入1000ul无水乙醇（96-100%，室温）至裂解液中，最高速度涡旋20秒混匀。将柱子稍微离心以收集盖子上的液滴。

5. 把GBC吸附柱装在在2ml收集管中（已提供），取第4步得到的溶液700μl转入柱中，10,000×g离心30秒，倒弃流出液重新套上收集管。

6.重复第五步，直至第四步的所有溶液过柱完毕。

温馨提示：第五、六步建议用真空泵替代离心操作，滤过更快。

7.加入500μl Buffer WB至柱子中，10,000×g离心30秒，弃去流出液。

注意：Buffer WB使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。

8. 将GBC吸附柱重新套回2ml收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前须要用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。

9.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液；

10. 将GBC吸附柱重新套回2ml收集管中，最大转速（>13.000×g）离心空结合柱1min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。

11. 将柱子置于1.5ml灭菌离心管，加入50-100μl TE或灭菌去离子水至柱子的膜中央，室温静置于2min；

12. 室温下，离心(>13.000)1min，以洗脱DNA。保留含DNA流出液。将DNA储于-20℃。

注意：为增加得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置2分钟，1,2000rpm离心2分钟。